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產(chǎn)品中心

RN38-EASYspin Plus 植物RNA快速提取試劑盒

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適用于快速提取植物組織細(xì)胞總RNA,使用獨(dú)有基因組DNA清chu柱技術(shù)可有效清chu電泳可見(jiàn)gDNA殘留,RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR,熒光定量PCR等。
參數(shù)品牌:艾德萊
產(chǎn)品參數(shù)
品牌:艾德萊
型號(hào):RN3802
起訂量:1
規(guī)格::50 次
價(jià)格::¥910
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產(chǎn)品詳情

RN38-EASYspin Plus 植物RNA快速提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格報(bào)價(jià)特價(jià)
RN3802EASYspin Plus 植物RNA快速提取試劑盒50次1300910


產(chǎn)品介紹:

     本公司獨(dú)家推出EASYspin無(wú)苯酚、氯仿RNA快速提取技術(shù)基礎(chǔ)上,又成功研發(fā)基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,植物RNA助提劑PLANTaid幫助結(jié)合多糖多酚并通過(guò)離心去除,然后裂解混合物用乙醇調(diào)節(jié)RNA結(jié)合吸附到基因組DNA清除柱,基因組DNA清除柱子同時(shí)吸附清除殘留的DNA, 然后RNA被選擇性洗脫濾過(guò)。濾過(guò)的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)去除, 最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。


產(chǎn)品特點(diǎn):

1.完全不使用有毒的苯酚,氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。 

2.簡(jiǎn)捷,單個(gè)樣品操作一般可在25分鐘內(nèi)完成,世界上最簡(jiǎn)單快速的試劑盒。 

3.特有的植物RNA助提劑可以有效結(jié)合多糖多酚,提高清除效果。 

4.成功研發(fā)基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。 

5.適應(yīng)性極其廣,可以提取包括棉花、松針、冬青樹葉、葡萄葉片、等100多種國(guó)內(nèi)外試劑盒提取失敗的樣品。詳細(xì)樣品列表請(qǐng)參考公司主頁(yè)產(chǎn)品介紹。 

6.多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9~2.2,基本無(wú)DNA殘留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各種實(shí)驗(yàn)。

其它公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案

很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產(chǎn)物、色素等成分,造成RNA提取過(guò)程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復(fù)雜。手工的CTAB類的方法提取因?yàn)闀r(shí)間太長(zhǎng),太繁瑣,手工方法不在討論之列。一直以來(lái)沒(méi)有一款好的試劑盒包括qiagen、promega等進(jìn)口試劑盒也無(wú)法滿足科研工作者對(duì)植物RNA提取的要求。

下面我們來(lái)分析一下植物RNA為什么不能提取成功的原因:

市面上最常見(jiàn)的RNA提取試劑盒無(wú)非是兩種:第一種:TRIzol改良類方法(包括溶液型的和離心柱型的)、第二種:直接裂解過(guò)柱子的方法(離心柱)

第一種試劑盒失敗的原因1RNA市面上面流行的方法就是Trizol,或者Triol改良,或者Trizol加離心柱一類的改良方法。trizol也就是異硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最適合的對(duì)象是動(dòng)物源性的組織細(xì)胞,針對(duì)普通多糖多酚低的植物性的材料,TRIzol類原理產(chǎn)品也可以提取。但是多糖、多酚、次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富的情況下,trizol類方法無(wú)法防止多糖多酚對(duì)于RNA/DNA分相的干擾,要么殘留大量DNA,要么殘留大量多糖、多酚或者次級(jí)代謝產(chǎn)物,氧化破壞RNA,或者殘留這些多糖多酚,色素代謝產(chǎn)物等抑制下游的反轉(zhuǎn)錄等反應(yīng)。限于技術(shù)水平的限制,市面上絕大多數(shù)的國(guó)產(chǎn)廠家是使用trizol的方法進(jìn)行改良,無(wú)論是不是加了離心柱。但是實(shí)踐證明,改良不能從根本上解決問(wèn)題。判斷是否試劑盒使用這種改良的方法非常簡(jiǎn)單:是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿,如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。

第二種試劑盒失敗的原因:直接裂解過(guò)柱子的方法是目前先進(jìn)的方法,但是也是技術(shù)含量最高的方法。這個(gè)方法采用裂解液(不含苯酚,氯仿)直接裂解,RNA/DNA同時(shí)過(guò)柱子,然后在柱子上面直接分離RNA/DNA,所以,這種方法的優(yōu)點(diǎn)第一在于,避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分離RNA/DNA的弊端、第二在于,不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因?yàn)槠浼夹g(shù)先進(jìn),所以難度很高,國(guó)內(nèi)廠家包括進(jìn)口公司有兩個(gè)技術(shù)難點(diǎn)一直沒(méi)有突破。第一,裂解液的成分必須針對(duì)去除多糖多酚進(jìn)行研發(fā)添加去多糖多酚,代謝產(chǎn)物成分。否則會(huì)同樣碰到多糖多酚干擾提取的問(wèn)題。第二、和trizol原理不同,直接過(guò)柱法DNA/RNA同時(shí)加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一個(gè)難點(diǎn)。否則會(huì)殘留大量DNA。兩個(gè)技術(shù)難點(diǎn)的沒(méi)有掌握導(dǎo)致了國(guó)內(nèi)公司包括的第二種試劑盒失敗。國(guó)外公司因?yàn)闆](méi)有掌握第一難點(diǎn),裂解液里面沒(méi)有去除多糖多酚成分,所以包括qiagen的盒子也常常不能成功提取植物RNA樣品。

本人領(lǐng)銜和研發(fā)團(tuán)隊(duì)配合經(jīng)過(guò)3年的不斷研發(fā)改良,針對(duì)多糖多酚植物的特點(diǎn),和這兩種試劑盒失敗的原因,開發(fā)出了EASYspin植物RNA快速提取試劑盒,第一采用直接過(guò)柱子方法,徹底拋棄了TRIZOL苯酚,氯仿原理方法,使用無(wú)毒原料,并且添加了有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的去除多糖多酚成分解決了多糖多酚和代謝產(chǎn)物對(duì)于RNA的破壞和干擾分離。第二突破了直接過(guò)柱子的方法DNA去除的技術(shù)難點(diǎn),解決了DNA殘留過(guò)多問(wèn)題。經(jīng)過(guò)實(shí)踐過(guò)程中,幾十種國(guó)內(nèi)試劑盒提取失敗和進(jìn)口試劑盒提取失敗的例子,使用我們開發(fā)的試劑盒提取,除了一例因?yàn)殡x心柱子堵塞導(dǎo)致失敗外,全部成功。而且,20分鐘提取步驟非常簡(jiǎn)單,非??焖?,無(wú)毒苯酚氯仿。全部提取成功的RNA可以成功完成下游反應(yīng)試驗(yàn)。

部分成功樣品:

植物:棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報(bào)春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻、慈姑、葛根、甘肅桃、玫瑰花、檳榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡楊、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、紅樹根、鐵線蕨、黃瓜、小麥葉子種子、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、馬尾松、蕪菁、毛果楊、木薯、大葉落地生根、山杏、旱柳、桉樹、琵琶花果、丹參、人參、西洋參、梔子、洋蔥、紅豆杉、梨樹葉、五倍子、泡桐、西瓜、芍藥、雪蓮等等,其中包括qiagen無(wú)法提取的黑加侖、冬青、月季、松針、葡萄葉片等,promega無(wú)法提取的海棠等樣品、均可用該產(chǎn)品成功提取。

真菌:桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、菇類等。


使用該產(chǎn)品發(fā)表的部分文章:http://www.aidlab.cn/news-show.asp?id=141


使用EASYspin/EASYspin Plus試劑盒已經(jīng)有大量文章發(fā)表,請(qǐng)聯(lián)系我們索取發(fā)表的文章和包括北京林業(yè)大學(xué),北京農(nóng)學(xué)院,中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),農(nóng)林科學(xué)院果樹研究所,林業(yè)所,中國(guó)農(nóng)科院等大學(xué)和研究院所大量使用案例。

1.     桃果實(shí)、花、根、葉:Isolation, characterisation and phylogenetic analysis of resistance gene    analogues in a wild species of peach (Prunus kansuensis).Canadian Journal of Plant Science,    2011, 91(6): 961-970

2.     櫻桃花、葉、顎等各部位:Over-expression of the PaAP1 gene from sweet cherry (Prunus avium    L.)    causes early floweri.Journal of Plant Physiology, 2012,Available online 1 December    2012

3.     洋蔥根、莖、蕾、葉、雌雄蕊等各部位Cloning and Expression Analysis of A Putative B Class MADS-box    Gene of AcPI in Onion. Scientia Agricultura Sinica, 2012, 45(23):4759-4769

4.     蕪菁:Isolation and Functional Characterisation of the Genes Encoding Δ8-Sphingolipid       Desaturase from Brassica rapa. Journal of Genetics and Genomics Volume 39, Issue 1, January    2012,    Pages 47–59

5.        1 EXPRESSION, DIVERGENCE AND EVOLUTION OF THE CALEOSIN GENE FAMILY IN BRASSICA RAPA. Arch. Biol. Sci., Belgrade, 65 (3), 863-876, 2013 DOI:10.2298/ABS1303863H

6.     番茄葉:Effect of Low Temperature Stress on the Expression of ProDH Gene and the Activities of the Proline Dehydrogenase in Leaves of Tomato Seedling. Chinese Agricultural Science  Bulletin 2012,28(10):132-135

7.     梔子葉:Isolation of High Quality Total RNA from Gardenia jasminoides Eills.Chinese Agricultural    Science Bulletin.2012, 28(27):194-198

8.     油桐果實(shí):Cui Qinqin, Han Xiaojiao, Chen Yicun, Zhan Zhiyong, Lin Liyuan, Wang Yangdong.     Isolation and Expression Characteristics of Biotin Carboxyl Carrier Protein Coding GeneVfBCCP)  from Vernicia fordii.SCIENTIA SILVAE SINICAE. 2012, 48(8): Available online August

9.     油桐果實(shí)1Selection of Reliable Reference Genes for Gene Expression Studies Using Real-Time    PCR in Tung Tree during Seed Development. PLoS ONE, 2012, 7(8): e43084

10. 紫菜:Molecular cloning and expression analysis of ribosomal protein S7 gene from Porphyra    haitanensis. JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA, 2011, 3512):1814-1821

11. 石斛:Molecular characterization of a mitogen-activated protein kinase gene DoMPK1 in Dendrobium officinale. Acta Pharmaceutica Sinica, 2012, 47 (12): 1703-1709

12. 石斛1ESTs Analysis Reveals Putative Genes Involved in Symbiotic Seed Germination in Dendrobium officinale. Symbiotic Germination Genes in D. officinale. August 2013 | Volume 8 | Issue 8 | e72705

13. 大豆:RNA-seq Analysis Reveals Ethylene-Mediated Reproductive Organ Development and Abscission in Soybean(Glycine max L. Merr.). Plant Mol Biol Rep, 2012, published online: 4 Dec, 2012

14. 大豆1Construction of ethylene regulatory network based on the phytohormones related gene transcriptome profiling and prediction of transcription factor activities in soybean. Acta Physiol Plant, 2012, published online: 12 Dec, 2012

15. 紅花玉蘭:Expression Analysis of MAwuAG in Different Organs and Developmental Stages of Magnolia wufengensis. Chinese Bulletin of Botany, 2013, 48 (2): 1–5

16. 毛桃:Cloning and Phylogeny Analysis of PpAP2 Floral Homologous Genes in Peach. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2013, 29(7): 99-104

17. 五倍子:Cloning and characterisation of a phenylalanine ammonia-lyase gene from Rhus chinensis. Plant Cell Rep, 2013, published online15 March, 2013

18. :五倍子1Cloning, characterization and expression of chalcone synthase from medicinal plant Rhus chinensis.J. Plant Biochem. Biotechnol. DOI 10.1007/s13562-013-0231-9

19. 青杄 cDNA Cloning and Bioinformatic Analysis of the sPPa1 Gene form Picea wilsonii. Plant Science Journal, 2012, 30(40): 394-401

20. 青杄 1cDNA Cloning and Bioinformatic Analysis of PsbO Gene from Picea wilsonii.Life Science Research, 2012, 16(3): 201-206

21. 青杄 2Cloning and Tissue Expression Analysis of PwPSAF in Picea wilsonii. SCIENTIA SILVAE SINICAE. Vol. 49,No. 10, Oct. 2013.

22. 洋蔥:Molecular Cloning and Transcriptional Analysis of the Putative AGAMOUS Homolog AcAG in Onion (Allium cepa. Plant Mol Biol Rep, DOI 10.1007/s11105-013-0607-y

23. 木瓜:XsFAD2 gene encodes the enzyme responsible for the high linoleic acid content in oil accumulated in Xanthoceras sorbifolia seeds. JOURNAL ARTICLE. 2013-6-17.

24. 木瓜1Two novel diacylglycerol acyltransferase genes from Xanthoceras 2 sorbifolia are responsible for its seed oil content. GENE-38688; No. of pages: 9; 4C:

25. 柑橘:Efficient auto-excision of a selectable marker gene from transgenic citrus by combining the Cre/loxP system and ipt selection. Plant Cell Rep, DOI 10.1007/s00299-013-1470-x

26. 柑橘1Expression Analysis of Three Phloem-specific Promoters in Transgenic Poncirus trifoliata. Acta Horticulturae Sinica. 2014, 41(1): 18.

27. 柑橘2 Activation of three pathogen-inducible promoters in transgenic citrus (Citrus sinensis Osbeck) after Xanthomonas axonopodis pv. citri infection and wounding. Plant Cell Tiss Organ Cult. DOI 10.1007/s11240-013-0423-y.

28. 茶梅花瓣:Comparison and Analysis of Methods of Extracting Total RNA from Petals of Camellia sasanqua. Chinese Agricultural Science Bulletin.2013,29(28):129-133.

29. 梔子:Isolation of High Quality Total RNA fromGardenia jasminoides Eills. Chinese Agricultural Science Bulletin. 2012, 28(27):194-198

30. 丹參:Genome-wide analysis and molecular dissection of the SPL gene family in Salvia miltiorrhiza. 2014 Jan;56(1):38-50. doi: 10.1111/jipb.12111. Epub 2013 Nov 20.

31. 牡丹:Transcriptome Comparison Reveals Key Candidate Genes Responsible for the Unusual Reblooming Trait in Tree Peonies. Genes Responsible for Reblooming in Tree Peonies. November 2013 | Volume 8 | Issue 11 | e79996

32. 東南景天:Role of sulfur assimilation pathway in cadmium hyperaccumulation by Sedum alfredii Hance. Ecotoxicology and Environmental Safety. Volume 100, February 2014, Pages 159–165.

33. 山蒼子:Identification of appropriate reference genes for normalizing transcript expression by quantitative real?time PCR in Litsea cubeba. TECHNICAL NOTE. Mol Genet Genomics (2013) 288:727–737, DOI 10.1007/s00438-013-0785-1

34. 木本植物:Heterologous gene silencing induced by tobacco rattle virus (TRV) is efficient for pursuing functional genomics studies in woody plants. ORIGINAL PAPER. Plant Cell Tiss Organ Cult, DOI 10.1007/s11240-013-0393-0

35. 棉花:Analysis of sea-island cotton and upland cotton in response to Verticillium dahliae infection by RNA sequencing. Sun et al. BMC Genomics 2013, 14:852 /1471-2164/14/852.

36. 桃子:Biochemical changes and defence responses during the development of peach gummosis caused by Lasiodiplodia theobromae. Eur J Plant Pathol (2014) 138:195–207, DOI 10.1007/s10658-013-0322-4.

37. 桃子1Carbohydrate metabolism changes in Prunus persica gummosis infected with Lasiodiplodia theobromae. Phytopathology "First Look" paper ? http://dx.doi.org/10.1094/PHYTO-01-13-0025-R ? posted 11/27/2013.

38. 海棠:The Malus crabapple transcription factor McMYB10 regulatesanthocyanin biosynthesis during petal coloration. Scientia Horticulturae 166 (2014) 42–49.

39. 海藻:A rapid and sensitive method for field detection of Prorocentrum donghaiense using reverse transcription-coupled loop-mediated isothermal amplification. Harmful Algae 29 (2013) 31–39.

40. 油茶:Establish a cDNA-AFLP Technology System in Camellia oleifera. Molecular Plant Breeding, 2013, Vol.11, No.5, 611-616.

41. 亞洲百合:Transcriptomic analysis of Asiatic lily in the process of vernalization via RNA-seq. Mol Biol Rep. DOI 10.1007/s11033-014-3250-2.

42. 毛泡桐:Dynamic expression of novel and conserved microRNAs and their targets in diploid and tetraploid of Paulownia tomentosa. Biochimie xxx (2014) 1e10.

43. 人參:Cloning and Sequence Analysis Squalene Epoxidase Gene in Panax gin-seng. Journal of Jilin Agricultural University 2014, 36(2): 149-152,17

44. 雪蓮:Cloning and Sequence Analysis of rbcs Gene from Sasussured involucrdta Kar. et Kir. Chinese Agricultural Science Bulletin 2014, 30(15): 261-267

45. 柑橘3Secreted Expression of Cecropin B Gene Enhances Resistance to Xanthomonas axonopodis pv. citri in Transgenic Citrus sinensisTarocco Acta Horticulturae Sinica 2014, 41(3): 417428 http: // www. ahs. ac. cn

46. 菊花:Stem apex detoxification culture markedly improved severalphysiological characters of chrysanthemum ‘YUTAI’. Plant Cell Tiss Organ Cult 2014, DOI 10.1007/s11240-014-0541-1

47. 蕎麥和擬南芥:Ectopic expression of FaesAP3, a Fagopyrum esculentum (Polygonaceae) AP3 orthologous gene rescues stamen development in an Arabidopsis ap3 mutant. Gene 2014, 550(2): 200–206

48. 油松:Differential expression of SLOW WALKER2 homologue in ovules of female sterile mutant and fertile clone of Pinus tabulaeformis. Russian Journal of Developmental Biology 2014, 45(2): 78-84

49. 玫瑰花:Precise spatio-temporal modulation of ACC synthase by MPK6 cascade mediates the response of rose flowers to rehydration. The Plant Journal 2014, 79(6): 941–950

50. 棉花和擬南芥:Functional characterization of GhAKT1, a novel Shaker-like K+ channel gene involved in K+ uptake from cotton (Gossypium hirsutum). Gene 2014, 545(1): 61–71

51. 棉花和擬南芥1Upland Cotton Gene GhFPF1 Confers Promotion of Flowering Time and Shade-Avoidance Responses in Arabidopsis thaliana. PLoS ONE 2014, 9(3): e91869. doi:10.1371/journal.pone.0091869

52. 白楊:Poplar GATA transcription factor PdGNC is capable of regulating chloroplast ultrastructure, photosynthesis, and vegetative growth in Arabidopsis under varying nitrogen levels. Plant Cell Tiss Organ Cult 2014, DOI 10.1007/s11240-014-0536-y

53. 毛果楊:Molecular characterization of the SPL gene family in Populus trichocarpa. BMC Plant Biology 2014, 14: 131

54. 葛根:Molecular cloning and characterization of an isoflavone 7-O-glucosyltransferase from Pueraria lobata. Plant Cell Reports 2014, 33(7), 1173–1185

55. 百合:Cloning and Expression Analysis of Actin GenelilyActinfrom Lily. Acta Horticulturae Sinica 2013, 40(7): 13181326

56. 百合1 Vernalization of Oriental hybrid lily ‘Sorbonne’: changes in physiology metabolic activity and molecular mechanism. Molecular Biology Reports 2014, DOI 10.1007/s11033-014-3545-3

57. 黃鵪菜:Transcriptome Sequencing and De Novo Analysis of Youngia japonica Using the Illumina Platform. PLoS ONE 2014, 9(3): e90636. doi:10.1371/journal.pone.0090636

58. 棉花1Gibberellin Overproduction Promotes Sucrose Synthase Expression and Secondary Cell Wall Deposition in Cotton Fibers. PLoS ONE 2014, 9(5): e96537. doi:10.1371/journal.pone.0096537

59. 蘋果:Low Medium pH Value Enhances Anthocyanin Accumulation in Malus Crabapple Leaves. PLoS ONE 2014, 9(6): e97904. doi:10.1371/journal.pone.0097904

 

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產(chǎn)品特點(diǎn):

1.完全不使用有毒的苯酚,氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。 

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3.特有的植物RNA助提劑可以有效結(jié)合多糖多酚,提高清除效果。 

4.成功研發(fā)基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。 

5.適應(yīng)性極其廣,可以提取包括棉花、松針、冬青樹葉、葡萄葉片、等100多種國(guó)內(nèi)外試劑盒提取失敗的樣品。詳細(xì)樣品列表請(qǐng)參考公司主頁(yè)產(chǎn)品介紹。 

6.多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9~2.2,基本無(wú)DNA殘留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各種實(shí)驗(yàn)。

其它公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案

很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產(chǎn)物、色素等成分,造成RNA提取過(guò)程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復(fù)雜。手工的CTAB類的方法提取因?yàn)闀r(shí)間太長(zhǎng),太繁瑣,手工方法不在討論之列。一直以來(lái)沒(méi)有一款好的試劑盒包括qiagen、promega等進(jìn)口試劑盒也無(wú)法滿足科研工作者對(duì)植物RNA提取的要求。

下面我們來(lái)分析一下植物RNA為什么不能提取成功的原因:

市面上最常見(jiàn)的RNA提取試劑盒無(wú)非是兩種:第一種:TRIzol改良類方法(包括溶液型的和離心柱型的)、第二種:直接裂解過(guò)柱子的方法(離心柱)

第一種試劑盒失敗的原因1RNA市面上面流行的方法就是Trizol,或者Triol改良,或者Trizol加離心柱一類的改良方法。trizol也就是異硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最適合的對(duì)象是動(dòng)物源性的組織細(xì)胞,針對(duì)普通多糖多酚低的植物性的材料,TRIzol類原理產(chǎn)品也可以提取。但是多糖、多酚、次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富的情況下,trizol類方法無(wú)法防止多糖多酚對(duì)于RNA/DNA分相的干擾,要么殘留大量DNA,要么殘留大量多糖、多酚或者次級(jí)代謝產(chǎn)物,氧化破壞RNA,或者殘留這些多糖多酚,色素代謝產(chǎn)物等抑制下游的反轉(zhuǎn)錄等反應(yīng)。限于技術(shù)水平的限制,市面上絕大多數(shù)的國(guó)產(chǎn)廠家是使用trizol的方法進(jìn)行改良,無(wú)論是不是加了離心柱。但是實(shí)踐證明,改良不能從根本上解決問(wèn)題。判斷是否試劑盒使用這種改良的方法非常簡(jiǎn)單:是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿,如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。

第二種試劑盒失敗的原因:直接裂解過(guò)柱子的方法是目前先進(jìn)的方法,但是也是技術(shù)含量最高的方法。這個(gè)方法采用裂解液(不含苯酚,氯仿)直接裂解,RNA/DNA同時(shí)過(guò)柱子,然后在柱子上面直接分離RNA/DNA,所以,這種方法的優(yōu)點(diǎn)第一在于,避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分離RNA/DNA的弊端、第二在于,不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因?yàn)槠浼夹g(shù)先進(jìn),所以難度很高,國(guó)內(nèi)廠家包括進(jìn)口公司有兩個(gè)技術(shù)難點(diǎn)一直沒(méi)有突破。第一,裂解液的成分必須針對(duì)去除多糖多酚進(jìn)行研發(fā)添加去多糖多酚,代謝產(chǎn)物成分。否則會(huì)同樣碰到多糖多酚干擾提取的問(wèn)題。第二、和trizol原理不同,直接過(guò)柱法DNA/RNA同時(shí)加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一個(gè)難點(diǎn)。否則會(huì)殘留大量DNA。兩個(gè)技術(shù)難點(diǎn)的沒(méi)有掌握導(dǎo)致了國(guó)內(nèi)公司包括的第二種試劑盒失敗。國(guó)外公司因?yàn)闆](méi)有掌握第一難點(diǎn),裂解液里面沒(méi)有去除多糖多酚成分,所以包括qiagen的盒子也常常不能成功提取植物RNA樣品。

本人領(lǐng)銜和研發(fā)團(tuán)隊(duì)配合經(jīng)過(guò)3年的不斷研發(fā)改良,針對(duì)多糖多酚植物的特點(diǎn),和這兩種試劑盒失敗的原因,開發(fā)出了EASYspin植物RNA快速提取試劑盒,第一采用直接過(guò)柱子方法,徹底拋棄了TRIZOL苯酚,氯仿原理方法,使用無(wú)毒原料,并且添加了有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的去除多糖多酚成分解決了多糖多酚和代謝產(chǎn)物對(duì)于RNA的破壞和干擾分離。第二突破了直接過(guò)柱子的方法DNA去除的技術(shù)難點(diǎn),解決了DNA殘留過(guò)多問(wèn)題。經(jīng)過(guò)實(shí)踐過(guò)程中,幾十種國(guó)內(nèi)試劑盒提取失敗和進(jìn)口試劑盒提取失敗的例子,使用我們開發(fā)的試劑盒提取,除了一例因?yàn)殡x心柱子堵塞導(dǎo)致失敗外,全部成功。而且,20分鐘提取步驟非常簡(jiǎn)單,非??焖?,無(wú)毒苯酚氯仿。全部提取成功的RNA可以成功完成下游反應(yīng)試驗(yàn)。

部分成功樣品:

植物:棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報(bào)春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻、慈姑、葛根、甘肅桃、玫瑰花、檳榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡楊、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、紅樹根、鐵線蕨、黃瓜、小麥葉子種子、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、馬尾松、蕪菁、毛果楊、木薯、大葉落地生根、山杏、旱柳、桉樹、琵琶花果、丹參、人參、西洋參、梔子、洋蔥、紅豆杉、梨樹葉、五倍子、泡桐、西瓜、芍藥、雪蓮等等,其中包括qiagen無(wú)法提取的黑加侖、冬青、月季、松針、葡萄葉片等,promega無(wú)法提取的海棠等樣品、均可用該產(chǎn)品成功提取。

真菌:桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、菇類等。


使用該產(chǎn)品發(fā)表的部分文章:http://www.aidlab.cn/news-show.asp?id=141


使用EASYspin/EASYspin Plus試劑盒已經(jīng)有大量文章發(fā)表,請(qǐng)聯(lián)系我們索取發(fā)表的文章和包括北京林業(yè)大學(xué),北京農(nóng)學(xué)院,中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),農(nóng)林科學(xué)院果樹研究所,林業(yè)所,中國(guó)農(nóng)科院等大學(xué)和研究院所大量使用案例。

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