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瓊脂糖Agarose,縮寫(xiě)為AG,是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份,也譯為瓊膠素或瓊膠糖。瓊膠糖化學(xué)結(jié)構(gòu)是由1,3連結(jié)的β-D-半乳糖和1,4連結(jié)的3,6-內(nèi)醚-L-半乳糖交替連接起來(lái)的長(zhǎng)鏈構(gòu)成。
瓊脂糖因?yàn)橛刑厥獾哪z凝性質(zhì),尤其有明顯的穩(wěn)固性、滯度和滯后性,并且易吸收水分,有特殊的穩(wěn)定效應(yīng);已經(jīng)廣F使用于食用、醫(yī)藥、化工、紡織等領(lǐng)域。
電泳技術(shù)特點(diǎn)
天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì),不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強(qiáng)酸性多糖,由于這些基團(tuán)帶有電荷,在電場(chǎng)作用下能產(chǎn)生較強(qiáng)的電滲現(xiàn)象,加之硫酸根可與某些蛋白質(zhì)作用而影響電泳速度及分離效果。因此,多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳,其優(yōu)點(diǎn)如下。
(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳。
(2)瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻,含水量大(約占98%~99%),近似自由電泳,樣品擴(kuò)散較自由電流,對(duì)樣品吸附極微,因此電泳圖譜清晰,分辨率高,重復(fù)性好。
(3)瓊脂糖透明無(wú)紫外吸收,電泳過(guò)程和結(jié)果可直接用紫外光燈檢測(cè)及定量測(cè)定。
(4)電泳后區(qū)帶易染色,樣品極易洗脫,便于定量測(cè)定。制成干膜可長(zhǎng)期保存。
常用瓊脂糖作為電泳支持物,分離蛋白質(zhì)和同工酶。將瓊脂糖電泳與免疫化學(xué)相結(jié)合,發(fā)展成免疫電泳技術(shù),能鑒別其他方法不能鑒別的復(fù)雜體系,由于建立了超微量技術(shù),0.1ug蛋白質(zhì)就可檢出。
瓊脂糖凝膠電泳也常用于分離、鑒定核酸,如DNA鑒定,DNA限制性?xún)?nèi)切核酸酶圖譜制作等。由于這種方法操作方便,設(shè)備簡(jiǎn)單,需樣品量少,分辨能力高,已成為基因工程研究中常用實(shí)驗(yàn)方法之一。
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對(duì)于分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳是用于分離、鑒定和提純DNA的片段的標(biāo)準(zhǔn)方法。瓊脂糖是從瓊脂中提取的一種多糖,具親水性,但不帶電荷,是一種很好的電泳支持物。瓊脂糖凝膠電泳是常用的檢測(cè)核酸的方法,具有操作方便、經(jīng)濟(jì)快速等優(yōu)點(diǎn)。